荧光假单胞菌2P24中RstA蛋白的功能鉴定

荧光假单胞菌2P24中RstA蛋白的功能鉴定，李谛音，何永兴，【目的】探究荧光假单胞菌2P24中OmpR家族转录因子RstA的功能，明确其对EmhABC外排泵的调控作用及机制。【方法】利用共适应分析预测RstA� 【荧光假单胞菌2P24中RstA蛋白的功能鉴定】 荧光假单胞菌2P24是一种常见的环境微生物，具有广泛的代谢能力和适应性，同时也是医疗环境中多重耐药性的研究对象。该文主要关注的是RstA蛋白，这是一种属于OmpR家族的转录因子，它在细菌的生存和适应环境中起着重要作用。 【目的】研究的主要目标是揭示RstA在荧光假单胞菌2P24中的具体功能，特别是它如何调控EmhABC外排泵的活性，以及这种调控对细菌对抗生素耐药性的影响。EmhABC外排泵是一种参与药物排出的膜蛋白复合体，能帮助细菌减少胞内药物浓度，从而提高耐药性。 【方法】研究者运用了共适应分析来预测RstA可能的生物学功能。通过比较野生型菌株和利用同源重组技术构建的缺失突变株（ΔrstA和ΔemhABC），他们检测了不同菌株对多种抗生素的敏感性变化。此外，他们使用定量实时逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）和β-半乳糖苷酶实验来测量emhABC基因在野生型和突变株中的转录和表达水平。进一步，通过表达纯化的His-RstA蛋白，研究人员进行了凝胶阻滞实验，以验证RstA是否能与emhABC基因启动子区域直接结合。 【结果】结果显示，RstA与EmhABC存在共适应性，暗示RstA可能在应对抗生素胁迫时发挥作用。ΔrstA和ΔemhABC菌株的抗生素耐受性显著降低，表明RstA对于维持细菌耐药性至关重要。同时，突变株ΔrstA中的emhABC转录和表达水平均显著下降，这进一步证实了RstA对emhABC的正向调控作用。凝胶阻滞实验表明，His-RstA蛋白能够特异性地与emhABC基因启动子区结合，这支持了RstA直接调控EmhABC表达的观点。 【结论】综合以上实验，可以得出结论，OmpR家族的转录因子RstA通过与emhABC启动子区域的结合，正向调控EmhABC外排泵的表达，进而影响荧光假单胞菌2P24的多重耐药性。这一发现对于理解细菌耐药性机制、寻找新的抗耐药策略具有重要意义。 关键词：微生物生理；荧光假单胞菌2P24；RstA蛋白；外排泵；多重耐药性 该研究由国家自然科学基金资助，进一步的研究可能会深入探讨RstA调控EmhABC的具体分子机制，以及在其他细菌中是否存在类似机制，以期为开发新型抗菌策略提供理论基础。